操作

1. 0.5-4μg(2μg)のRNAを取り、滅菌ミリQ水で9μlに希釈する。
   (エタノール沈殿のサンプルは、遠心後、上清を捨てさらに80%エタノールで洗浄後、乾燥させミリQ水に溶解する)


2. 以下の溶液をサンプルの数だけ調整する(マスターミックス)



(1サンプル分)
5xfirst strand buffer (Gibco BRL)	4μl
0.1M dTT (Gibco BRL)	2μl
10 mM dNTPs	2μl
random primer (Promega)(0.5μg/μl) (またはoligo dT primer)	1μl
RNase Inhibitor (Wako)	1μl
M-MLV reverse transcriptase (Gibco BRL)	1μl



3. マスターミックス11μlとRNA9μlをPCR用チューブ(またはエッペンドルフチューブ)内に入れる。


4. 37℃、1時間、サーマルサイクラー(または水層)にて保温する。


5. 95℃(または煮沸している湯)で5分保温。


6. 4℃(またはon ice)で保存(cDNA溶液)

(4-6はサーマルサイクラーのプログラムで行うと便利である)